纤维素酶法提取白鲜皮黄酮工艺

材料和方法

1.1材料

1.1.1原材料

白鲜皮。

1.1.2试剂

纤维素酶、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠芦丁标准对照品。

1.2实验方法

1.2.1芦丁标准曲线的制定

分光光度计法测定天然植物中黄酮含量，精确称取5mg芦丁标准品，至于50mL容量瓶内，加超纯水25mL、无水乙醇25mL，摇晃并振荡，待其充分溶解，备用。

分别准确吸取备用芦丁标准液O、0.5、1.0、1.5、2.0mL和2.5mL于10mL的容量瓶中，先各加入30%的乙醇溶液4 mL，再各加入质量分数5%的亚硝酸钠溶液0.5 mL，摇匀，静置6min。各加质量分数10%硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，静置6min。再各加质量分数4%氢氧化钠溶液2 mL，摇匀，以30%乙醇溶液补足至10mL，摇匀，静置15 min。以芦丁标准液加入量为0的处理作为空白对照。将不同浓度的芦丁标准液在510nm下扫描测定其吸光度值A，制作芦丁标准品浓度与吸光度关系表，见表1。标准曲线如图1所示，标准方程为y=1.238 9x+0.001 5，R²=0.999 9。

1.2.2单因素试验

（1）料液比对黄酮提取率的影响。准确称取1.0 g白鲜皮，加酶量20mg，白鲜皮与水的比例分别为1：10、1：15、1：20、1：25、1：30，酶解时间150min，酶解温度50℃。

（2）加酶量对黄酮提取率的影响。准确称取1.0g白鲜皮，加酶量分别为0、20、30、40mg和50mg，白鲜皮：水=1：20，酶解时间150 min，酶解温度50℃。

（3）酶解温度对黄酮提取率的影响。准确称取1.0g白鲜皮，按白鲜皮：水=1：20，酶解时间150min，酶解温度分别为40、45、50、55℃和60℃。

（4）酶解时间对黄酮提取率的影响。准确称取1.0g白鲜皮，加酶量20mg，按白鲜皮：水=1：20，活化时间45min酶解时间分别为30、60、90、120min和150min，酶解温度50%。

2结果与分析

2.1单因素实验

通过表2～5可知，最佳单因素分别为液料比1：20、加酶量30 mg、酶解温度55℃、酶解时间120min。

2.1.1料液比对黄酮提取率的影响

液料比单因素考察见表2。

2.1.2加酶量对黄酮提取率的影响

加酶量单因素考察见表3。

2.1.3酶解温度对黄酮提取率的影响

酶解温度单因素考察见表4。

2.1.4酶解时间对黄酮提取率的影响

酶解时间单因素考察见表5。

2.2正交试验

2.2.1正交试验设计

根据各单因素试验数据得出的水平，以加酶量（A）、料液比（B）、酶解时间（c），酶解温度（D）设计正交试验，见表6。

2.2.2正交试验

正交试验结果见表7。根据表7得知，4种因素对白鲜皮黄酮提取率影响程度依次为加酶量>酶解时间>酶解温度>料液比。比较得出最佳提取因素为A2B3C1D2，即加酶量30mg，料液比1：25，酶解时间90 min，提取温度为55℃，制备的白鲜皮黄酮含量最高。进一步经变异系数分析得：1-RSD=1-[（0.03²+0.12²+0.08²+0.033²+0.022²+0.022²+0.038²+0.033²+0.062²+0+0.075²+0.065²）/（11×1.69²）1/2≈0.964，说明变异系数很小，数据有很强依据性。

3结论与讨论

本文通过分光光度法测吸光值作为白鲜皮黄酮提取效果评价指标，纤维素酶辅助提取法操作较为简单。比之传统的醇提法，所采用纤维素酶辅助提取法能明显提高提取效率，从而更好地利用白鲜皮。也为其他学者提供纤维素酶法提取提供经验。

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