液基细胞学联合CEA、CA199、KI—67检测在胸腹水恶性肿瘤中的表达
摘要目的：研究液基细胞检测技术联合EA、A199、I-67在胸腹水癌细胞检测中的作用。方法：收治胸腹水患者98例分别采用传统细胞涂片法、液基细胞制片法辅以免疫组织化学染色法比较两种方法的制片质量及细胞学检测结果。结果：液基细胞制片法的制片质量优于传统细胞涂片法诊断阳性率高于传统细胞涂片法两组间差异有统计学意义（P均<.1）。结论：液基细胞检测技术能明显提高胸腹水癌细胞检出率提高免疫组化阳性率能更好地为临床恶性肿瘤的诊断提供参考。
关键词液基细胞学免疫组化恶性肿瘤
超薄液基细胞检测近年来在非妇科方面的应用开始广泛推广。胸腹水细胞学检查是临床病理检查的常用方法也是诊断疾病的重要手段根据细胞形态推测原发灶为临床治疗提供可靠的诊断依据。随着液基细胞检测在非妇科方面特别是胸腹水的应用使得细胞标本的采集、制片和诊断技术方面都有很大进步使胸腹水恶性肿瘤的确诊率明显提高。本研究对例诊断为癌细胞的胸腹水标本分别作液基细胞检测技术与传统细胞涂片法辅以EA、A199、I-67免疫组化基因检测探讨液基细胞检测技术对其恶性肿瘤的诊断价值。
资料与方法
7～1年收治胸腹水患者98例传统普通细胞涂片例男6例女1例年龄19～88岁平均55.5岁；新柏氏TT技术检测58例男9例女9例年龄1～8岁平均55.岁。诊断由手术或活检病理组织学证实。其中胸腹水腺癌5例鳞状细胞癌5例良性结果68腺癌组包括肺癌5例卵巢癌例胰腺癌1例和胃肠癌17例；良性组包括肺炎6例结核例肝硬化7例肾病综合征1例间皮瘤1例未明原因1例其他例。对此分别作TT涂片和传统涂片。
方法：①传统细胞涂片法：胸腹水采集后充分震荡立即加入离心管中以r/分的转速离心1分钟（离心半径15cm）吸弃上清液将沉淀物吸至干净的载玻片上均匀涂片～张。干燥后以95乙醇固定1分钟行HE染色树胶封片后光镜观察。②液基细胞制片法：将胸腹水标本置于洁净、干燥的离心管中加入枸橼酸钠抗凝以转/分的转速离心1分钟弃上清液置漩涡混合器上震荡秒往离心管中加入1ml细胞保存液静置5分钟弃置上清液。用软吸管吸取细胞清洗液至5ml将标本混匀后置漩涡混合器上震荡秒用新柏氏液基细胞沉降式自动制片机自动涂片95乙醇固定1分钟巴氏染色封片行细胞镜检。③免疫组化采用EnVision法涂片风干后于95乙醇固定1分钟；水洗、画圈、PB冲洗；免疫组化试剂EA、I67、A199均购自福州迈新公司。
统计学处理：数据采用检验。
结果
液基细胞学诊断的腺癌组EA、A199、i67阳性率高于良性组见图1～6表1。
两组间差异有显著性（P均<.1）说明使用液基细胞检测技术检测胸腹水肿瘤标记物EA、Al99、i67阳性率高于传统涂片技术。
讨论
液基细胞检测技术是世纪9年代发展起来的一项制片技术最初用于妇科宫颈细胞学的检测目前随着病理学的发展其在胸腹水等非妇科领域也得到应用。
由于胸腹水多数是转移癌细胞的所在约98以上其中腺癌居多8以上。胸腹水标本制片受到胸腹水的新鲜程度、细胞数量、退变程度、血细胞含量多少、涂片的薄厚、固定状态以及染色情况等因素的影响。传统普通制片技术常有大量红细胞、炎性渗出物及黏液混杂在一起造成背景不清晰；同时普通手工涂片细胞薄厚不均匀细胞多层重叠较为严重有些阳性细胞甚至被干扰物所覆盖并且结构不清细胞受机械力作用发生人为的异常变化面积大而敏感性较低。给诊断带来不利因素易产生假阳性或假阴性结果。而且单个癌细胞容易漏诊。TT技术制作的单层细胞涂片背景清晰被检细胞集中容易阅片。与传统普通制片方法比较TT检测技术改善了样本的收集方法使细胞均匀分布在载玻片上不仅除去了黏液、红细胞及炎性渗出物而且保存了细胞的完整无损同时保全细胞的抗原生物特性对免疫组化染色无任何影响有利于肿瘤细胞的鉴别诊断。当需要重复制片和免疫组化标记时不需要再次采集标本用剩余在保存液瓶中的标本即可制片。液基制片细胞薄背景清晰单个细胞易检出。便于诊断所取标本量大克服了细胞不均偶然性强的不足；同时读片面积缩小细胞集中利于仔细地读片也缩短了读片时间。有作者报道胸腹水的肿瘤标记物水平高于血清学水平对恶性肿瘤更具诊断价值。EA是一种比较常用的肿瘤标记物对腺癌有较高的敏感性尤其在消化道癌的表达水平较高在肺癌、卵巢癌及乳腺癌也有不同程度的表达。A199是一种与腺癌有关的抗原物质在消化道上皮内含量最高本研究针对肺癌、消化道癌、生殖系统上皮性癌等易产生胸腹水的恶性肿瘤选用特异性较强的肿瘤标记物。EA、I-67、Al99检测其在胸腹水中的含量。研究结果显示三种标记物在恶性胸腹水（腺癌）的水平均高于非肿瘤性胸腹水提示胸腹水EA、I67、A199含量的增高对腺癌的诊断具有临床意义。
本组检测结果表明传统普通细胞涂片与TT技术相比癌的确诊率和可疑癌所占比例差异有高度显著性（检验P<.1）。TT技术可明显提高确诊率降低可疑癌的诊断率更能为临床治疗提供可靠的诊断依据。胸腹水患者联合采用肿瘤标记物检测能对两种检测方法起到互补的作用。而肿瘤标记物升高则应再次做细胞学检测以提高对恶性胸腹水的早期诊断率避免漏诊。
参考文献
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