应用ＥＬＩＳＡ法检测人体血清中ＨＦＲＳ抗体的研究

摘 要 目的：通过检测人体血液中抗肾综合出血热（HFRS）病毒抗体产生情况，分析人体体液免疫效果。方法：以HFRS病毒灭活纯化抗原为包被Ag以HRP-兔抗人IgG结合物为标记抗体，应用间接ELISA法检测随机抽取的20组HFRS双价纯化疫苗接种者免疫前、后血清抗体的产生情况,并采用蚀斑减少中和试验(PRNT)法进行中和抗体的检测。结果：第1针免疫后14天与免疫前比较，90%以上的血清抗体滴度有4倍以上升高；第2针免疫后14天与第1针免疫后14天比较，100%的血清抗体滴度有4倍以上升高；第2针免疫后14天中和抗体阳转率则达90%以上。 结论：应用间接ELISA法检测人体血清中HFRS抗体产生情况可以用于分析疫苗免疫前后人体体液免疫效果。

关键词 肾综合征出血热 抗体 免疫 ELISA

材料与方法

HFRS纯化疫苗的生产制备：用HFRS病毒PS-6株（Ⅰ型）［1］和L99株（Ⅱ型）毒种［2］感染原代金黄地鼠肾细胞，收获病毒液灭活后，以体积比1∶1的比例配制成双价疫苗，经超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析等纯化步骤制备HFRS双价纯化疫苗原液，即为包被抗原。纯化原液中再加入人血白蛋白和Al(OH)3等保护剂后，经分装、检定合格后即为HFRS双价纯化疫苗。

免疫与采血：采用0、14天两针免疫程序，接种部位为上臂三角肌内，每人每次接种1.0ml；于免疫前、第1针和第2针免疫后14天分别采血，分离血清。

实验材料：阳性抗原为HFRS病毒灭活双价纯化抗原，包被工作浓度10μg/ml；阴性对照抗原为未感染病毒的正常原代金黄地鼠肾细胞培养液；辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体为HRP-兔抗人IgG结合物，工作稀释度为1∶1000；检测样品为随机抽取的20组HFRS双价纯化疫苗接种者的免疫前、第1针和第2针免疫后14天的血清。

检测：采用间接ELISA法［3］检测。

人体血清中抗HFRS病毒中和抗体的检测：采用蚀斑减少中和试验（PRNT）法进行检测。

结果

人体血清中抗HFRS病毒ELISA抗体的产生情况：免疫前血清中抗HFRS病毒的ELISA抗体有18份为阴性，只有2份为弱阳性，详见表1。

人体血清中抗HFRS病毒中和抗体的产生情况：应用PRNT法对第2针免疫后14天的血清进行了中和抗体的检测，结果详见表1。

讨论

本实验室成功应用这种检测方法对疫苗免疫前后人体体液免疫效果进行了分析，表明了此种检测方法在HFRS的研究和防治方面应用的可行性和重要意义。应用间接ELISA法检测人体血液中HFRS抗体的检测技术除了可用于疫苗的临床观察以外，还可以用于HFRS的流行病学调查和患者的辅助诊断等许多方面。而ELISA检测法以其方便、快捷等优点，被广泛应用到相关学科的各个领域。

参考文献

1 姚树元,杭长寿,邱建明,等.汉坦病毒PS-6株的分离及生物学性状研究.中华微生物学和免疫学杂志,2000，20（6）:536-539.

2 刘佩芹,廖化新,傅建林,等.从罗赛鼠及社鼠中分离出流行性出血热病毒及其抗原性鉴定.江西医学院学报,1984，3:1-6.

3 徐宜为.免疫检测技术.第2版.北京:科学出版社,1997.

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